El Museo Arqueológico ocupa la Torre del Agua, un bastión de la muralla almohade del siglo XII reformado en el XIV por la Orden de Calatrava. Sus cuatro salas repasan la historia de la antigua Urso, desde la Prehistoria hasta época romana, con reproducciones de los relieves ibéricos hallados en Osuna. Entrada individual de 4 €, con visitas guiadas de martes a domingo.
El Museo de Osuna ocupa el palacio dieciochesco de los hermanos Arjona y Cubas, en la calle Sevilla. El recorrido empieza en la bodega de la casa y continúa por salas dedicadas a la historia local, a los fondos del archivo y a colecciones de arte como las de Rodríguez Jaldón y Rodolfo Álvarez Santaló, además de exposiciones temporales. En el mismo edificio está la Oficina de Turismo.
Museo dedicado a la infancia de los años setenta y ochenta, con más de 4.000 piezas entre juguetes, álbumes de cromos y tebeos. Abre jueves por la tarde y de viernes a domingo y festivos; permanece cerrado de junio a septiembre.
La Casa de la Cultura ocupa el antiguo colegio de los jesuitas, organizado en torno a un amplio claustro. Acoge la biblioteca y el archivo municipal, además de exposiciones y actividades culturales.
Centro universitario adscrito a la Universidad de Sevilla, heredero de la tradición de la antigua Universidad de Osuna. Organiza cada año sus Cursos de Otoño.